如何選擇層析填料 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ??
●五大類層析方法? 1.尺寸排阻(SEC)
????????????????? 2.離子交換(IEX)
????????????????? 3.親和層析(AFC)
????????????????? 4.疏水層析(HIC)
????????????????? 5.反相層析(RPC)
●介質(zhì)—顆粒越細(xì)、大小越均勻,分辨率越高,但反壓亦較高。
●物理穩(wěn)定性—能承受高流速,同時(shí)保持柱床體積和結(jié)構(gòu)穩(wěn)定,省去了每次重新裝柱的流程,提高重復(fù)性。
●化學(xué)穩(wěn)定性—能承受極端pH,高鹽,利于開發(fā)分離條件和在線清洗(CIP),大大延長(zhǎng)介質(zhì)壽命和提高重復(fù)性。
若對(duì)目標(biāo)蛋白或者樣品不大了解,可以嘗試以下方法:
●使用分離范圍寬廣的凝膠過濾介質(zhì),依據(jù)分子量將樣品分成不同組分。
●用含專一配體或抗體的親和層析介質(zhì)結(jié)合目標(biāo)蛋白,一步即可得到高純度樣品;也可以用各種活化偶聯(lián)介質(zhì)偶聯(lián)目標(biāo)蛋白的底物、受體等自制親和介質(zhì)。
●體積大的樣品,往往使用離子交換層析來濃縮和粗純化;高鹽洗脫的樣品再用疏水層析純化。
●疏水層析用高鹽吸附、低鹽洗脫的原理,洗脫的樣品又可直接上離子交換介質(zhì);兩種方法常被交替使用。
對(duì)體積不同的柱子來說,體積流速不能直接用作比較,一般都換算成線性流速,再做比較:
檢測(cè)裝柱效果一般用<0.5%(~30μm介質(zhì))或<2%(~90μm介質(zhì))柱體積的1%丙酮測(cè)試柱效和峰形。
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